CRISPR-Cas9是目前操作最簡便、耗時最短的基因編輯技術,已廣泛應用于多種物種的基因編輯[1]。CRISPR-Cas9的應用形式通常是構建一個含有特定物種內源性啟動子并連接Cas9基因和sgRNA的質粒,并將其轉入細胞或體內表達。然而,質粒的構建和驗證過程繁瑣,耗費大量的實驗時間;并且質粒轉入細胞或體內后,其降解需要一段時間,這可能會對后續實驗產生影響。

為提高CRISPR-Cas9實驗效率,保障實驗效果,泓迅科技推出即用型sgRNA合成服務,我們可以完成sgRNA靶位點的設計、sgRNA?DNA模板的合成、sgRNA體外轉錄以及sgRNA的純化,為客戶提供可轉入動物細胞并直接發揮作用的sgRNA。泓迅科技即用型sgRNA為您省去了質粒構建過程,消除滯留質粒對后續實驗的潛在影響,節約實驗時間。目前,體外轉錄的sgRNA已成功的對斑馬魚[2]、小鼠[3]以及絲狀真菌[4]等物種中的基因進行了準確的編輯。

此外,我們公司設計3條人和大鼠通用的negative control sgRNA (Syno? negative control sgRNA1,Syno? negative control sgRNA2,Syno? negative control sgRNA3),這3條negative control sgRNA不能靶向人和大鼠的基因序列,可以用作CRISPR/Cas9基因編輯的陰性對照實驗。

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成服務優勢:

  1. 一站式服務:可以提供從sgRNA靶位點設計到高純度即用型sgRNA獲取的全部過程
  2. 周期短:最快3個工作日交付產量可達20ug
  3. 方便快捷:即用型sgRNA可直接注射或轉染細胞進行基因編輯實驗

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成泓迅案例:

泓迅科技CRISPR-Cas9 sgRNA設計中心針對小鼠的多個基因各設計了8個sgRNA,然后進行體外sgRNA轉錄實驗,實驗周期短至2天,sgRNA制備量為10-20ug,可以極快地滿足相關細胞學實驗的一般需求。

實驗流程:

一步法合成gRNA DNA模板

一步法合成gRNA DNA模板

grna-dna

實驗結果:

  1. 將gRNA DNA模板平連至pUC57載體測序,比對結果與設計序列一致。如圖1所示。
  2. 圖1.平連結果與設計序列比對圖

    圖1.平連結果與設計序列比對圖

  3. 將通過體外轉錄得到的sgRNA在2%的瓊脂糖中進行電泳,可以看到清晰條帶。如圖2所示。
  4. 圖2. sgRNA瓊脂糖凝膠電泳圖

    圖2. sgRNA瓊脂糖凝膠電泳圖

  5. 我們對其中一條sgRNA序列進行驗證,首先將sgRNA逆轉錄獲得cDNA,設計sgRNA擴增引物,經過PCR反應獲得sgRNA的DNA序列;其次將DNA序列平連至pUC57載體進行測序,結果顯示sgRNA序列正確。如圖3所示。
  6. 圖3. sgRNA序列驗證瓊脂糖凝膠電泳圖

    圖3. sgRNA序列驗證瓊脂糖凝膠電泳圖

    注:1PCR結果的模板是sgRNA 逆轉錄cDNA;2PCR結果的模板是經DNaseI處理的sgRNA;3PCR結果的模板是體外轉錄的DNA模板

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成服務周期及價格:

服務名稱 產品/服務內容 交付周期 交付項目 價格
即用型sgRNA合成
  1. sgRNA設計
  2. DNA模板合成
  3. 體外轉錄sgRNA及純化
  1. <10條,5個工作日
  2. 2.10-20條,10個工作日
  3. >20條,咨詢
sgRNA COA文件 詢價
Syno??negative control sgRNA
  1. negative control sgRNA
  2. 體外轉錄sgRNA及純化
3條,5個工作日 3條Syno??negative control sgRNA 詢價

即用型CRISPR-Cas9 sgRNA合成訂購與咨詢:
您可以通過以下任意方式下單或咨詢,工作時間我們保證在1小時內給您反?。?/p>

  1. Email:請將您的需求發送到[email protected]
  2. 電話咨詢:您可以直接撥打免費熱線4000-973-630轉803聯系我們經驗豐富的工程師
  3. QQ咨詢:任何技術問題均可與我們在線互動,泓迅科技官方企業QQ:4000-973-630

參考文獻:

[1]Jinek M, Chylinski K, Fonfara I, Hauer M, Doudna JA, Charpentier E. A programmable dual-RNA-guided DNA endonuclease in adaptive bacterial immunity [J]. Science. 2012,337(6096):816-821.
[2]Xiao A, Wang Z, Hu Y, et al. Chromosomal deletions and inversions mediated by TALENs and CRISPR/Cas in zebrafish [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(14):e141.
[3]Fujii W, Kawasaki K, Sugiura K, Naito K. Efficient generation of large-scale genome-modified mice using gRNA and CAS9 endonuclease [J]. Nucleic Acids Res. 2013,41(20):e187.
[4]Liu R, Chen L, Jiang Y, Zhou Z, Zou G. Efficient genome editing in filamentous fungus Trichoderma reesei using the CRISPR/Cas9 system. Cell Discovery. 2015.7.