CRISPR-Cas9技術是目前大熱的基因編輯技術,它利用短RNA(gRNA)來引導核酸酶(Cas9)到達DNA靶點。該技術使用簡單而且擴展性強,已被廣泛應用于實驗室研究、生物醫學研究、動植物基因工程等領域。包括建立各種遺傳修飾的模式生物模型、建立基因調控(如敲除、插入、抑制、激活)細胞系、動植物育種、遺傳疾病修復、癌癥等重大疾病治療以及相關藥物靶點篩選等。

泓迅科技提供sgRNA質粒構建服務,針對不同物種(動物、植物等)提供多種質粒構建方案,可以最大程度的匹配實驗所用材料,提高質粒構建的成功率,為您提供快速、優質的sgRNA載體構建服務。

CRISPR-Cas9 sgRNA載體構建服務優勢:

  1. 全模式物種sgRNA設計:可完成13種模式動物的sgRNA設計服務;
  2. 豐富的質粒結構:可提供多種物種經過驗證的質粒結構,滿足您的實驗需求;
  3. 成功率高:針對不同基因設計多個靶點,提高質粒構建的成功率;
  4. 質粒驗證服務:構建質粒的同時,也可提供sgRNA活性驗證服務,檢測sgRNA活性,提高實驗成功率。

sgRNA及Cas9質粒構建載體圖

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CRISPR-Cas9 sgRNA載體構建服務流程

步驟 服務內容
明確物種和載體 不同物種不同載體
設計靶點 一般在不同轉錄產物的共同外顯子上設計3-5個靶點,盡可能破壞重要的domain和所有轉錄產物isoform。
常用靶點設計網站://crispr.mit.edu/
合成 合成前確認檢測靶點是否存在SNP(如果存在SNP,則不能用T7E1酶檢測是否存在突變)
靶點切割活性檢測 293T細胞內檢測SSA活性 酶體外切割活性驗證(推薦)
內源活性驗證 ? ? ?
(有條件選擇)
若目的細胞轉染率高,如293T細胞,可轉染72h后提基因組,擴增靶序列,T7E1酶切驗證,進一步測序驗證。

 
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