基因編輯技術的飛速發展, 特別是近年來CRISPR技術的廣泛應用,使得人類擁有了前所未有的改變和修飾基因組的能力。CRISPR技術來源于細菌本身對抗噬菌體的“免疫系統”,這項技術利用單鏈引導RNA(sgRNA)和Cas9蛋白,可以在體內和體外簡單、迅速、低成本實現基因編輯。利用CRISPR技術不僅可以對編碼基因進行有效編輯和基因組的大規模篩選,而且還可以結合NGS對非編碼RNA(ncRNA)進行功能研究。

CRISPR技術已經廣泛應用于全球各個實驗室,幾乎可以對所有細胞系和大多數常用實驗動物的遺傳物質進行改造。CRISPR技術在人類遺傳性疾病、病毒感染疾病和癌癥的相關研究中具有廣闊前景和巨大發展潛力。

哺乳動物細胞基因/基因組編輯操作流程

哺乳動物基因編輯流程

哺乳動物細胞基因/基因組編輯研究思路

1.哺乳動物細胞基因敲除(knock-out) /敲入(knock-in)

研究思路
  1. 基因組定制化的
    sgRNA設計
  2. 基因組或者Panel
    范圍內的基因調取
    與sgRNA設計
  1. Syno? 2.0基因合
    與載體構建平臺
  2. ?Syno?3.0sgRNA
    文庫構建平臺
  3. ?多模式物種的載體
    序列設計
  1. 體外sgRNA活性驗證
  2. 體內sgRNA活性驗證
  1. 穩定細胞株構建
  2. 基因敲除動物模型構建

2.哺乳動物細胞非編碼RNA功能研究

哺乳動物細胞非編碼RNA功能研究
  1. 基因組或者Panel
    范圍內的基因調取
    與pg-sgRNA設計
  1. Syno?2.0基因合成載體
    構建
    平臺
  2. Syno? 3.0 sgRNA文庫構建
  3. 多模式物種的載體序列設計
  1. 慢病毒文庫包裝
  2. NGS驗證文庫質量
  1. 篩選前后NGS數據對比
  2. 細胞株構建或動物模型建立

哺乳動物基因編輯服務優勢

right一站式服務
泓迅科技提供從sgRNA設計、合成及活性檢測,到穩定細胞株或動物模型構建和篩選的整體解決方案

right專利的技術平臺
擁有專利的sgRNA設計軟件,能夠高效準確提供多物種序列設計方案

rightsgRNA文庫合成
擁有專利的Syno? 3.0芯片合成平臺,文庫構建覆蓋率95%以上

right高通量功能篩選平臺
可提供全基因組文庫高通量篩選,可平行分析大量細胞的基因功能,鑒定相關的候選基因

哺乳動物細胞基因/基因組編輯應用案例

【泓迅案例】 構建人類sgRNA文庫

【應用案例1】哺乳動物細胞CRISPR-Cas9的基因編輯

【應用案例2】 CRISPR-Cas9系統用于lncRNA基因的高通量功能篩選

參考文獻
Ran, F.A., et al., Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. Nature Protocols, 2013. 8(11): p. 2281-2308